生化試劑盒 - 超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

Superoxide Dismutase (SOD) Activity Assay Kit

一、超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品描述 

超氧化物歧化酶（SOD）是一種廣泛存在于生物體內(nèi)的金屬酶，作為重要的氧自由基清除劑，能 催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用，生成 H2O2 和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶，也是 H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。 黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)能夠產(chǎn)生超氧陰離子（O2 -），O2 -可還原氮藍(lán)四唑生成藍(lán)色甲臜， 產(chǎn)物在 560 nm 處具有特征吸收峰；SOD 可清除 O2 -，從而抑制了甲臜的形成，反應(yīng)液顏色越深，表 明 SOD 活性愈低，反之活性越高，通過(guò)吸光值的變化即可表征 SOD 的活性。

二、超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品內(nèi)容圖示

三、超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品使用說(shuō)明 

測(cè)定過(guò)程中所需要的儀器和試劑：可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿（光徑 10 mm）/96 孔板、研缽/勻漿器、可調(diào)式移液器、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴/培養(yǎng)箱和蒸餾水。

①粗酶液的制備（可根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果適當(dāng)調(diào)整樣本量及比例） ①組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為 1：（5-10）的比例（建議稱(chēng)取 0.1 g 組織，加 入 1 mL 提取液）處理樣品，冰浴勻漿，4℃ 8000 g 離心 10 min，取上清置于冰上待測(cè)。

②細(xì)菌或細(xì)胞：離心收集細(xì)菌或細(xì)胞至離心管內(nèi)，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL） 為（500-1000）：1 的比例（建議 500 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1 mL 提取液）處理樣品，冰浴超聲破碎（功 率 20%或 200 W，超聲 3 s，間隔 10 s，重復(fù) 30 次），4℃ 8000 g 離心 10 min，取上清置于冰上待測(cè)。

③血清（漿）、培養(yǎng)液等液體樣本：直接檢測(cè)或使用提取液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行檢測(cè)。

吸光值測(cè)定：測(cè)定 560 nm 處吸光值，記為 A 測(cè)定、A 對(duì)照、A 空 1、A 空 2；計(jì)算 ΔA 測(cè)定=A 測(cè)定-A 對(duì)照，ΔA 空白=A 空 1-A 空 2。注：空白管 1 和空白管 2 只需測(cè)定 1-2 管，每個(gè)樣本均需設(shè)一 個(gè)對(duì)照管。

超氧化物歧化酶（SOD）活性計(jì)算 （1）抑制百分率的計(jì)算

注：抑制百分率應(yīng)控制在 30-70%范圍內(nèi)，越靠近 50%越準(zhǔn)確；若抑制百分率小于 30%或大于 70%， 則需要調(diào)整樣本量后重新測(cè)定：若抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；若抑制百分率偏低，則需適 當(dāng)增加樣本量后再進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算時(shí)相應(yīng)修改

SOD 酶活性計(jì)算公式圖示：

注釋?zhuān)篤 反總：反應(yīng)體系總體積，0.2 mL；V 樣：反應(yīng)體系中加入粗酶液的體積，0.02 mL；V 樣 總：粗酶液總體積，1 mL；Cpr：粗酶液蛋白濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總 數(shù)，500 萬(wàn)；D：樣本稀釋倍數(shù)。

四、超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng) 

①待測(cè)樣本和試劑二使用時(shí)在冰上放置； 

②樣本較多時(shí)可按表格中試劑用量配置工作液（包含試劑一、二、三），試劑五必須最后加入； 

③為保證結(jié)果準(zhǔn)確且避免試劑損失，測(cè)定前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)（以實(shí)際收到說(shuō)明書(shū)內(nèi)容為準(zhǔn)）， 確認(rèn)試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備是否充分，操作步驟是否清楚，且務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本進(jìn)行預(yù)測(cè)定， 過(guò)程中問(wèn)題請(qǐng)您及時(shí)與工作人員聯(lián)系。